命運之夜
聖杯：傳說中可實現持有者一切願望的寶物。而為了得到聖杯的儀式就被稱為聖杯戰爭。
參加聖杯戰爭的7名由聖杯選出的魔術師被稱為御主（マスタ?，英文Master），與7名被稱為從者（日文:サ?ヴァント；英文Servant）的使魔訂定契約。他們是由聖杯選擇的七位英靈，被分為七個職階，以使魔的身份被召喚出來。
能獲得聖杯的只有一組，這7組人馬為了成為最後的那一組而互相殘殺。
基本沒有學習魔術的才能的魔術師主角衛宮士郎，偶然地與從者中的劍士·Saber（セイバ?）訂定契約，被捲入聖杯戰爭當中。fate線中，衛宮士郎發現自己愛上自己召喚出來的從者Saber，但最後得知聖杯的真相，叫Saber親手破壞了聖杯,導致契約無效化，Saber回到理想鄉，從此分隔於兩個世界。
還是彼此深愛著。
主人公·女主人公
衛宮士郎（えみやしろう，ShirouEmiya，聲優：杉山紀彰；野田順子（幼年）／台灣：劉傑；雷碧文（幼年））
身高：167cm，體重：58kg
印象顏色：赤銅
擅長：修理、家庭料理
喜歡的東西：家庭料理難對付的東西：言峰綺禮
男主角。為穗群原學園（ほむらばら/Homurabara）高中部二年級學生，口頭禪「為什麼（なんでさ）」。
見習中的魔術師，10年前冬木市（Fuyuki）大火中的少數生還者之一。被身為魔術師的衛宮切嗣所救出並收養，受衛宮切嗣的影響，是個英雄迷，併發誓長大之後一定要成為「正義的夥伴」拯救所有受到苦難的人們。所以只要是他人的請求他從不會拒絕。很喜歡Saber，對她有特別的愛意（在前面自己一直沒發現）。擅長分晰物件結構和修理電器。雖然是魔術師，不過除了強化及投影以外，並不會其他的基本魔術。
天生就對劍特別喜好。此外弓術也早已到達了大師的境界，「箭矢呢，是在射出前就已經射中了的」，因此他唯一的失誤只是因為他本來就沒有要讓箭矢擊中紅心。擁有技能：投影所有理解範圍內的寶具（限定劍屬性）。由於本身的屬性是劍，雖然並非天才，亦沒有卓越的才能，但是憑藉著認真和不懈的努力，終於得到了與其付出的努力相對應的成績，可以在暴走狀態下瞬間讀取眼裡所見的每把劍寶具，並將其投影出來。因此在UBW線中與英雄王匹敵。此外固有結界－無限劍制由於與Archer的心靈狀態不大相同，因此唱誦的咒文也有一些差別。
根據投影的規則，就算完美的投影出寶具，也會比原先的寶具降低一個等級。但是可以連同使用者的經驗一同拷貝，所以只要投影出來的劍都能夠立刻的上手使用，彷佛是自己曾用過的劍一樣。
士郎的自我治療能力是來是他體內Saber的鞘，此寶具必須與Saber建立契約以及她的魔力才能發動，靠近Saber效果更明顯。
此外英雄王的EA是採用太古時代的技術所創造出來的，因此連士郎都無法理解其構造。
Saber（セイバー，聲優：川澄綾子／台灣：雷碧文/Animax粵語：郭碧珍）
身高：154cm，體重：42kg，三圍：B73/W53/H76(cm)
印象顏色：青
喜歡的東西：細慢的吃飯討厭的東西：大大咧咧的吃飯、裝飾過多
屬性：秩序·善
本作FATE線的女主角。原型是英格蘭傳說中的國王，圓桌騎士團的首領——亞瑟王（KingArthur）。與士郎訂定契約o劍士的英靈，是個擁有一頭亮麗金髮與深綠眼睛的美少女。她的職階（class）被譽為所有從者中最優秀的。性格忠誠老實，一本正經，不愛言談，也很有責任感，不過有時也會顯現出少女該有的樣子。到後半段對主人衛宮士郎，也產生了愛情（為傲嬌的代表人物之一）。因為主人不懂得最基本的魔力迴流魔術，因而無法補給魔力給她，必須自行由食物和睡眠里補給，平時用風王結界（BarrieroftheWindKing）令劍處於隱形狀態。特別喜歡女孩子不喜歡的獅子。
真實身份是不列顛傳說的英雄亞瑟王，真名為阿爾托莉雅（ArturiaPendragon）的女性，擁有亞瑟王的神劍Excalibur（誓約勝利之劍）。來到現世，目的只有一個，取得聖杯並實現回去古時不列顛，把王位傳於下一代。裝置於士郎體內的寶具是Saber曾經遺失的劍鞘「絕世獨立的理想鄉（Avalon）」，因此就算受了極近瀕死狀態的傷勢都能夠順利的復原。是當年切嗣為了救士郎而將概念武裝Avalon放在士郎體內的。在與英雄王的戰鬥下，使用了Avalon成功的遮斷了英雄王的EA，由於那是傳說中亞瑟王死後到達的"理想鄉"，因此就連五大魔法都無法對其干涉。
遠坂凜（とおさかりん，RinTohsaka，聲優：植田佳奈／台灣：楊凱凱/Animax粵語：吳梅）
身高：159cm體重：47kg三圍：B77/W57/H80(cm)
生日：2月4日血型：O型
印象顏色：紅
擅長：毫無錯漏的處理事情
喜歡的東西：寶石磨光難對付的東西：電子機器全能、突發性的事件
本作UBW（UnlimitedBladeWork）線的女主角。與士郎在同一個學園（2年A組）讀書的美女魔術師。為有著悠久歷史的魔術名門遠坂家的繼承人，傳說遠坂家祖上的大師父是魔法使，而遠坂家世代為冬木市這塊土地的管理者，繼承先父的遺志參加聖杯戰爭。在學校扮演著優等生的身份，但事實她是一名愛嘲諷和作弄別人的小惡魔型少女但同時也是一個愛照顧人的大姐姐。作為魔術師有著高強的實力，不過經常在重要的地方發生失誤。
凜擅長的是寶石魔術，一般魔力在自己體外后容易氣化難以保存，但是遠坂的血統與寶石相性相當的高，每日都可以把自己多餘的魔力保存，日積月累下來下的威力(跟價值)都相當可觀，其中凜有十顆威力高達A+可傷害從者的寶石，但是在Saber的A級對魔力下會無效化。
由於寶石魔術是屬於用完即丟的模式，花費相當的大，因此對金錢話題十分的敏感。凜其實是個貧窮的大小姐。
在料理方面，至少在中華料理上比士郎要擅長。
間桐櫻（まとうさくら，SakuraMatou，聲優：下屋則子／台灣：林美秀/Animax粵語：潘芳芳）
身高：156cm體重：46kg三圍：B85/W56/H87（cm）
生日：3月2日血型：O型
印象顏色：櫻花色
擅長：家務全能、按摩
喜歡的東西：甜的東西、怪談難對付的東西：體育、體重計
本作HF（HeavensFeel）線的女主角。間桐慎二的妹妹，比士郎低一個年級的後輩，同時是弓道社社員，對士郎而言像是妹妹一樣的存在。在士郎面前總是充滿笑容，擁有沉穩的性格，過去經歷十分陰暗，後來由於藤村大河和衛宮士郎的影響變得比較開朗，現在每日都到士郎的家準備早飯、晚飯。
本名是遠坂櫻，與凜是姐妹，因魔術師家族只會把魔術刻印傳給其中一個繼承者所繼承，而間桐家同時要求過繼一個擁有魔術迴路的人當繼承人，所以遠坂櫻成為了間桐櫻，被間桐家折磨了11年，擁有與凜相當的魔術迴路。
Servant（サーヴァント）
Archer（アーチャー聲優：諏訪部順一／台灣：黃天佑）
身高：187cm，體重：78kg
印象顏色：紅
擅長：修理、家務全能
喜歡的東西：所以家務（本人否認）難對付的東西：正義的夥伴
屬性：中立·中庸
與凜訂定契約o弓兵的英靈。經常嘲諷他人的現實主義者，不過與凜之間互相有著堅強的羈絆。喜歡單獨行動，明明是Archer卻喜歡近身戰，拿手的武器是雌雄雙刀－幹將莫邪，超人的弓技直到Fate/hollowataraxia才展現。他本人自稱由於召喚時的事故忘了自己的真身為何，拿手的技術是家事全能，凜曾稱讚過他泡的紅茶非常好喝。
有【錬鉄の英雄】的別名。本次聖杯戰爭唯一來自未來的英靈，真名是「エミヤ」(Emiya衛宮)，是未來成熟的衛宮士郎，他戰鬥的一個重要目的是要殺死衛宮士郎以避免重演他自己悲慘的命運。
具有魔術師的能力也是他象徵性的寶具「固有結界（BoundedField）」UnlimitedBladeWorks（無限劍制），遊戲中曾經擊殺狂戰士（Berrker）6次，動畫中擊殺Berrker5次。
Berrker（バーサーカー聲優：西前忠久／台灣：黃天佑/Animax粵語：盧雄）
身高：253cm，體重：311kg
印象顏色：鉛色
擅長：因為狂化而沒有
喜歡的東西、難對付的東西：因為狂化而沒有
屬性：混沌·狂
狂戰士的英靈。其正體是海格力斯（Heracles，或譯為赫拉克勒斯、赫丘力士），是希臘神話中最偉大的英雄，身高高達253cm，擁有能使持有者重生並且記錄傷害持有者的寶具使其再一次攻擊持有者[無效化]的寶具「十二的試練（GodHand）」。雖然職階是所有從者中最低的，但是擁有所有從者中最優秀的戰鬥能力,可惜因為狂化的效果,令他不能使出對軍寶具射殺百頭。海格力斯是這次愛茲貝倫家犯規召喚來的從者，以犧牲理性的方式換取壓倒性的破壞力。
如果說Saber是最優秀的Servant，那Berrker則是最強的Servant。
Lancer（ランサー聲優：神奈延年／台灣：林谷珍）
身高：185cm，體重：70kg
印象顏色：青
擅長：釣魚、潛入、登山
喜歡的東西：氣勢強的女人、無理的約定（約束）
難對付的東西：不直接的方針，背叛
屬性：秩序·中庸
槍騎兵的英靈。個性自我、豪放不羈，重視約定勝於性命。持有對人寶具「刺穿死棘之槍（GaeBolg）」，號稱必中心臟的魔槍，另一招為「穿刺死翔之槍」，乃威力極大的對軍寶具。真身為愛爾蘭神話英雄庫丘林（CuChulainn，又譯庫夫林）。一開始為了殺人滅口而追逐撞見自己與Archer之間戰鬥的士郎，反而促使士郎在情急之下召喚出Saber，喜歡單獨行動與痛快淋漓的戰鬥，偵查任務是在Master命令下不得不為的工作。本性善良，在FATE線曾幫助SABER對抗英雄王吉爾伽美什，在UBW線則保護了凜。同時在UBW線可以看出，Lancer十分的欣賞凜。
Rider（ライダー聲優：淺川悠／台灣：錢欣郁/Animax粵語：潘芳芳）
身高：172cm，體重：57kg，三圍：B88/W56/H84（cm）
印象顏色：黑
擅長：騎馬、驚險的雜技、尾隨
喜歡的東西：酒、讀書、蛇難對付的東西：鏡子、身高測定
屬性：混沌·善
騎士的英靈。因此擅長在特殊地形（如高空）戰鬥。Rider這個職階同時必需擁有強力寶具才能擔任，使用可隱形的鎖鏈刃作為武器。FATE線被Saber所殺，HeavenFeel線TrueEnding與遠坂姐妹和衛宮士郎一起生活。
身分為希臘神話中的女妖美杜莎（Medusa，又譯梅杜莎）。如同此名有著駕馭傳說中天馬的騎乘能力，具有極高的機動性，持有寶具為「自我封印o暗黑神殿（BreakerGorgon）」、「他者封印o鮮血神殿（BloodFortAndromeda）」與「騎英之韁繩（Bellerophon）」，也擁有特殊技能石化魔眼（Cybele）。原為間桐櫻的從者，但在間桐臟現（ZokenMatou，間桐慎二之祖父）的命令下將令咒轉讓予間桐慎二。
Caster（キャスター聲優：田中敦子／台灣：林美秀）
身高：163cm體重：51kg三圍：B82/W57/H84（cm）印象顏色：紫
擅長：奸計、模型製作
喜歡的東西：沉默誠實的人、可愛的衣服和少女
難對付的東西：肌肉
屬性：中立·惡
魔術師的英靈，能夠使用自神話時代以後就不存在的高等魔術。並以柳洞寺當作根據地，擅長策略。
真實身份為米蒂亞（メディア/Medea），在希臘神話中是以背叛和欺騙聞名的女神，寶具是「破盡萬法之符（RuleBreaker）」，用來破除任何契約能力。因自身也是魔術師的關係所以能召喚從者，因此她利用了這個規則漏洞召喚了Assassin。
用計殺死前主人後，被葛木宗一郎撿到，與葛木訂下契約（非正式御主）。
Assassin（アサシン聲優：三木真一郎／台灣：吳文民）
身高：176cm體重：63kg
印象顏色：群青
擅長：劍
喜歡的東西：花、鳥、風、月難對付的東西：沒有特別難對付的
屬性：秩序·惡
暗殺者的英靈，有「氣配遮斷（PrenceConcealment）」這樣能偷偷靠近暗殺對象的特殊技能。
本身是一位無名的劍客。但是因為與歷史的佐佐木小次郎有著相符的條件，並且學會了佐佐木小次郎的絕技。燕返。而被作為佐佐木小次郎而召喚。
佐佐木小次郎對聖杯沒興趣，只是想與強者過招。沒有任何寶具，但憑著一己之力練出了「燕返」（SwallowReversal,同一時間和對手斬出三刀），有著接近對人寶具級的威力。單論劍技的話是眾從者中最強的，連Saber也未必是其對手。
由Caster利用自身也是魔術師的規則漏洞召喚訂定契約，只擁有生存二十天的靈力，而且不能離開柳洞寺的大門，只能充當守門人。
Gilgamesh（ギルガメッシュ聲優：關智一／台灣：吳文民）
身高：182cm體重：63kg
印象顏色：金
擅長：帶著金錢
喜歡的東西：自己、權力難對付的東西：自己、蛇
屬性：混沌·善
本作幻之第八名從者，前回（第4次）聖杯戰爭中與Saber留到最後的英靈，最後Saber也沒辦法得知他的身分，因為找不到他象徵性的寶具。曾在前次對決時向Saber表白但失敗。也出現在動畫劇情中。個性超級自大，完全的自我中心，但本人自稱「不驕傲的哪算是王！」。
真名為英雄王「吉爾加美什」（（ギルガメッシュ，Gilgamesh）），為蘇美爾傳說中烏魯克的國王。寶具是王之財寶（GateofBabylon），源自於基加美修收集全世界的寶具，將無數的珍貴兵器當成箭射出。寶具「天之鎖（ChainofHeaven）」神性愈高就會鎖得愈緊，還擁有唯一的對界寶具─「開天闢地·創世之星」（EnumaElish，名稱源自於巴比倫古代史詩）。個人能力在眾多Servent中僅僅偏上，遠不如騎士王，甚至不敢與Saber近身戰鬥；但憑其寶具質量、數量，實力遠超過其它Servent，Saber亦無法與之對敵。只有遊戲版完成了固有結界的士郎可以一決高下。
由於將寶具作為弓矢使用的方法，因此在第四次聖杯戰爭職階為Archer。
除了他大概沒有其他英靈可以抵抗聖杯的黑色物質，他的高傲就連黑色物質也沒有辦法污染。